Как музей историко-мемориального профиля, Дом-музей В.И. Ленина в г. Самаре был открыт 3 января 1940 г.
На начальном этапе своего существования его экспозиция располагалась только на втором этаже исторического дома и носила документально-иллюстративный характер, повествуя о симбирском, казанском, самарском и других этапах жизни В.И. Ленина, мемориальной была лишь комната молодого Владимира Ульянова.
Весь первый этаж занимала с 1924 года сначала библиотека политического просвещения публичного пользования, а затем детская библиотека.
К 100-летию со дня рождения В.И. Ленина, в апреле 1970, на втором этаже музея практически полностью (за исключением кухни) была восстановлена мемориально-бытовая обстановка самарской квартиры семьи Ульяновых, а на первом этаже развёрнута научно-документальная экспозиция «В.И. Ленин в Самаре.1889-1893 гг.», рассказывающая об основных этапах самарского периода жизни вождя мирового пролетариата. Обе экспозиции носили стационарный характер.